Témakiírások
A Penicillium chrysogenum antifungális fehérje (PAF) interakciójának vizsgálata
témakiírás címe
A Penicillium chrysogenum antifungális fehérje (PAF) interakciójának vizsgálata
intézmény
doktori iskola
témakiíró
tudományág
témakiírás leírása
A PAF fehérjét egy fonalas gomba a Penicillium chrysogenum termeli nagy mennyiségben. Fonalas gombák növekedését gátolja, közöttük számos növényi és humán patogén faj van. A PhD munkában elsősorban a PAF támadáspontját szeretnénk megtalálni, mivel előkísérleti eredményeink azt valószínűsítik, hogy receptor(ok)hoz kötődik és aktiválja a FadA-SfaD-GpgA heterotrimer G-proteint, amely a protein kináz A-t indukálja. Ez az Aspergillus nidulansban élettani változásokat eredményez: ioncsatornák aktiválódnak, ami K+-effluxhoz és a sejtek hiperpolarizációjához vezet. Ezzel párhuzamosan vagy ennek eredményeként a mitokondriumokban reaktív oxigénformák halmozódnak fel, ami a mitokondriumok pusztulásához, mitoptózishoz vezet. Ez végső soron a sejtmagban a DNS fragmentálódását, azaz programozott sejthalált indukál az Aspergillus nidulansban. A PAF-receptor felderítése közvetve az apoptózis elindításában szerepet játszó receptor megismerését is eredményezheti.
Intracelluláris receptorok keresése konvencionális élesztő két hibrid módszerrel:
A pGAD424 (GAL4aktivátor domén-vektor) és pGBT9 (GAL4 –DNS-kötő domén vektor) expressziós vektorokat, és a Y190 S. cerevisiae törzset használnánk. Bait-ként egyrészt az érett PAF proteint, másrészt mivel előzetes kísérletek szerint a pro szekvencia szükséges a megfelelő térszerkezet elnyeréséhez, a proPAF proteint teszteljük majd, a prey vektor pedig A. nidulans cDNS könyvtárt hordozza.
Ha a PAF receptora membránhoz kötött, akkor az élesztő-két hibrid módszer nem alkalmazható technika. Ebben az esetben a phage display módszert használnánk. A PAF-ot egy műanyag felszínre kötjük ki, készítünk egy fág-A. nidulans cDNS könyvtárat fúzionáltatva egy a fág felszínén megjelenő fehérjével, így a kifejezett fehérjéink is megjelennek a fágok felületén. Majd a „fág-display” könyvtárat hozzáadnánk a felszínen kötött PAF-hoz. A PAF-hoz kötődő fágok nem moshatóak le a felszínről és ezekből a fágokból kivont DNS-ből meghatározható a kölcsönható fehérje szekvenciája.
Intracelluláris receptorok keresése konvencionális élesztő két hibrid módszerrel:
A pGAD424 (GAL4aktivátor domén-vektor) és pGBT9 (GAL4 –DNS-kötő domén vektor) expressziós vektorokat, és a Y190 S. cerevisiae törzset használnánk. Bait-ként egyrészt az érett PAF proteint, másrészt mivel előzetes kísérletek szerint a pro szekvencia szükséges a megfelelő térszerkezet elnyeréséhez, a proPAF proteint teszteljük majd, a prey vektor pedig A. nidulans cDNS könyvtárt hordozza.
Ha a PAF receptora membránhoz kötött, akkor az élesztő-két hibrid módszer nem alkalmazható technika. Ebben az esetben a phage display módszert használnánk. A PAF-ot egy műanyag felszínre kötjük ki, készítünk egy fág-A. nidulans cDNS könyvtárat fúzionáltatva egy a fág felszínén megjelenő fehérjével, így a kifejezett fehérjéink is megjelennek a fágok felületén. Majd a „fág-display” könyvtárat hozzáadnánk a felszínen kötött PAF-hoz. A PAF-hoz kötődő fágok nem moshatóak le a felszínről és ezekből a fágokból kivont DNS-ből meghatározható a kölcsönható fehérje szekvenciája.
felvehető hallgatók száma
1 fő
jelentkezési határidő
2009-05-15