témavezető: Ongrádi József
helyszín (magyar oldal): Semmelweis Egyetem helyszín rövidítés: SE
A kutatási téma leírása:
Az emberi és állati adenovírusok (AdV) heveny megbetegedések kiváltása mellett fontos szereppel rendelkeznek immunszuppresszió fenntartásában, és hozzájárulhatnak a daganat ellenes immunfelügyelet jelentős gyengüléséhez. AdV korai génjei in vitro transzaktiválják a humán immundeficiencia vírust (HIV). AIDS betegek jelentős részében szokatlan AdV re-kombinánsok jelennek meg, halálukat okozva. A jelenségek pathomechanizmusa nem ismert. Ezen káros hatások mellett AdV rekombinánsok kitűnő vektoroknak bizonyultak génterápia számára. Az AdV célsejt specificitásának hiánya és a legtöbb emberben már meglévő AdV ellenes ellenanyagok neutralizáló hatásának kiküszöbölése gátolja a széleskörű felhasználást.
1975 óta vizsgáltuk emberi latens (Ad1, Ad5) és onkogén (Ad12) adenovírusok szerepét az immunszuppresszióban és onkogenezisben. Megállapítottuk, hogy a lappangó Ad5 fertőzést endotoxin fellobbantja, a vírusszaporodást prednisolon fokozza. Prostaglandin F2a hatására aktivált celluláris protein kinázok vírusmutánsok késői fehérjéit foszforilálva vírus replikációt indítanak el. Perzisztáló AdV fertőzést találtunk juvenilis parodontosisban és parodonditisben szenvedő betegek orális lymphocytáiban, amely párhuzamos a falósejtek csökkent anti-bakteriális aktivitásával. AdV-k onkogén képességével arányosan a fertőzött lymphocytákból felszabaduló mediátorok gátolják falósejtek baktericid képességét, ugyanakkor a baktériumok szaporodását fokozzák. Urológiai daganatokban szenvedő betegek lymphocytáiban AdV génexpressziót igazoltunk. Macska-AIDS modellben tanulmányozva az AdV szerepét, első-ként írtuk le macskák nemzetközi savógyűjteményében AdV antitestek jelenlétét, izoláltuk az első macska-adenovirust (FeAdV), amely bekerült a Nemzetközi Vírusrendszertanba. FeAdV hexon és fiber génjének szerkezetét meghatároztuk. FeAdV fiber egy specifkus mutációjának eredményeként szokatlan módon integrinekhez kötődve sokféle emberi és állati sejteket képes fertőzni, ugyanakkor fiber elleni emberi AdV ellenes antitestekkel nem reagál. Hasonló mutáció létrehozása a vektor kutatás egyik kulcsfeladata jelenleg, a neutralizáció hiánya pedig a FeAdV emberi alkalmazását könnyíti meg. Lymphocyták, monocyták felszínén AdV-kötő integrinek alig fejeződnek ki, ezért FeAdV oltását követően kicsi a veszély, hogy ezen sejtek fertőződjenek, bennük latens vírushordozás és következményes immunszuppresszió alakuljon ki. Ezek alapján a FeAdV kitűnő jelöltnek látszik emberi génterápia vektoraként.
CÉLKITŰZÉSEK
1.Adenovírus és HIV egyidejű hordozásának és génexpressziójának vizsgálata külön-böző stádiumban lévő és különféle járulékos daganatban szenvedő HIV-fertőzöttekben. Adenovírusok esetében a korai (pl. E1A, E1B) és késői (L) gének aktivitását, HIV esetében elsősorban a reguláló gének (tat, rev, vpr, vif, nef, stb) génexpreszióját mérjük quantitatív reverz transzkriptáz PCR segítségével, a betegekből származó lymphocytákban. A méréseket kiterjesztjük az MHC I és II, p53 és Rb tumorszuppresszor gének aktivitására és a betegekben párhuzamosan hordozott HSV-1, HSV-2, HHV-6/7, EBV, HHV-8 korai géntermékeinek mérésére. Ugyanezen celluláris és FIV géneket mérjük macska immundeficiencia vírusával (FIV) fertőzött kijáró, kísérletesen kettősen oltott kísérleti macskák lymphocytáiban. A reverz zoonosis igazolására emberekből és macskákból kitenyésztett vírusokat jellemzünk (antigén ELISA, PCR). Ezen a ponton kapcsolódik jelen témánk Dr. Kárpáti Sarolta által vezetett Doktori Program keretében a „Mikrobák mint kórokozók, kofaktorok és opportunista fertőzések retrovírus fertőzésekben” c. másik PhD témához. FIV és FeAdV hordozó ill. fertőzött macskákban, AdV és HIV fertőzött emberekben vizsgáljuk a cytokin-, kemokin-, apoptosis gének expresszióját.
2. A FeAdV felhasználása vektorként Kaposi-sarcoma és a daganatos érképződés génterápiája során. A FeAdV részletes biológiai és molekuláris és jellemzése a fent említett másik PhD programban folyik. Jelen keretek között a FeAdV génterápiára való előkészítését végezzük. E célra felszínükön integrinben gazdag célsejtek látszanak ideálisnak, de ezek mellett Coxsackie-vírus-adenovírus receptorban hiányos sejtek, pl. endothel és símaizom sejtek, valamint utóbbiak tulajdonságaira emlékeztető Kaposi-sarcoma sejtek is alkalmasak FeAdV-vel való fertőzésre. A FeAdV E1 gén kifejeződését endothel sejt specifikus promoter beültetésével szabályozzuk, ezáltal csak a célsejtekben szaporodó rekombináns vírust nyerünk. Ezen rekombináns FeAdV E3 gén helyére Kaposi-sarcoma vírus (HHV-8) latenciájában, tumorképzésében és HIV-transzaktiválásában szerepet játszó orf 72, orf 73 és K13 génjének, valamint a vírusszaporodást szabályozó orf50 génnek antiszenz, interferáló (iRNS) formáját ültetjük be, hogy meggátoljuk a HHV-8 szaporodásához, daganatkeltéséhez, HIV transzaktiválásához szükséges fehérjék transzlációját. Ennek a rekombináns FeADV-nak a génexpresszióját, HHV-8 és Kaposi-sarcoma ellenes hatását PEL sejtkultúrákban és transzgén egerekben fogjuk tanulmányozni. Szolid tumorokban képződő új erek endothel sejtjei is integrinben gazdagok. A fentiekhez hasonlóan az endothel specifikus FeAdV E3 génjének helyére apoptosis enzimkaszkád vagy immuntoxin gént ültünk. Siker esetén klinikai kipróbálást javasolunk.
felvehető hallgatók száma: 3
Jelentkezési határidő: 2019-10-10
2024. IV. 17. ODT ülés Az ODT következő ülésére 2024. június 14-én, pénteken 10.00 órakor kerül sor a Semmelweis Egyetem Szenátusi termében (Bp. Üllői út 26. I. emelet).
Bejelentkezés
