témavezető: Magyar Zoltán
helyszín (magyar oldal): ELKH, Szegedi Biológiai Kutatóközpont helyszín rövidítés: SZBK
A kutatási téma leírása:
A növényeknél az ivarsejtek a fejlődés késői szakaszában a virágok képződése során testi sejtekből jönnek létre, de a szabályozás molekuláris folyamatai még nem teljesen ismertek. A növényekben az állatokhoz hasonlóan a sejtosztódás és a differenciálódás közti átmenetet egy evolúciósan konzerválódott transzkripciónális szabályozási mechanizmus, az E2F-RB szabályozza. A Retinoblasztoma (Rb) az első tumor szupresszor, amit előszőr állatokból azonosítottak, míg az E2F transzkripciós faktorok az Rb elsődleges effektor molekulái. A molekuláris kutatások modell növénye, az Arabidopsis egyetlen Retinoblasztoma-rokon (RBR) fehérjével és három, vele komplexet formálni képes E2F transzkripciós faktorral rendelkezik. Az E2FA és E2FB aktivátor, míg az E2FC represszor típusú transzkripciós faktor. Azonban a három E2F transzkripciós faktor szerepe a sporofita fejlődés során lényegesen átfed egymással, és az RBR fehérjével is. Az e2f mutánsok jellemzése ugyanakkor funkciónális különbségekre is rávilágított: az E2FA és E2FB funkciók elvesztését a növények csak részben képesek tolerálni, így olyan dupla e2fab mutánst nem lehet előállítani, ahol mindkét aktivátor E2F elveszíti a konzervált MARKED-BOX (MB) domént. Az egyik MB domén elvesztése pedig jelentősen csökkenti a maghozamot, és rendellenes ivarsejtképződéshez vezet. Mindez az aktivátor E2F-ek esszenciális szerepére utal az ivarsejtképződésben, és ez a központi szerep a konzervált MB doménhez köthető. Az állati E2F fehérjék tanulmányozása során kimutatták, hogy az MB domén a fehérje kölcsönhatásokban játszik fontos szerepet és rendelkezik egy Rb kötő doménnel is. Kimutattuk, hogy az aktivátor típusú E2FA és E2FB fehérjék is kölcsönhatnak az RBR-el az MB doménjükön keresztül, míg az E2FC erre nem képes. A kutatás során olyan transzgenikus Arabidopsis növényeket hozunk létre, ahol vizsgálni tudjuk az E2FA és az E2FB MB doménjéhez asszociálódó fehérjéket a virágfejlődés során. Ehhez az e2fab mutánsokban E2FA vagy E2FB deléciós származékokat a saját promóterük ellenőrzése alatt fejeztetünk ki a fluoreszcens GFP fehérjével fúzióban, amelyek az MB domént még tartalmazzák. Riporter vonalak segítségével konfokális lézer mikroszkópia alatt nyomon követjük az E2FA és E2FB fehérjéket az ivarsejtképzős során. A transzgenikus vonalak makroszkópiás, és molekuláris jellemzése a projekt fontos része. A különböző egyedi e2fa és e2fb valamint dupla e2fab mutánsok és komplementált vonalaink segítségével direkt kötési (kromatin immunoprecipitálás ChIP) és expressziós (RNS szekvenálási) vizsgálatokon keresztül az E2F célgéneket is meghatározzuk a fejlődő ivarszervekben.
előírt nyelvtudás: angol ajánlott nyelvtudás (magyar oldal): angol további elvárások: A kutatási téma irodalmi hátterének az ismerete. Molekuláris alap ismeretek, labor gyakorlat, növények nevelése in vitro és in vivo. Mikrószkópiás elmélet megszerzése, új technikák elsajátítása. Elkötelezettség, és motiváltság a projekt irányában.
Bejelentkezés
