témavezető: Acsády György
helyszín (magyar oldal): Semmelweis Egyetem Érsebészeti Klinika helyszín rövidítés: SE
A kutatási téma leírása:
Az atherosclerosis kialakulása multifaktoriális folyamat, amely során környezeti és genetikai tényezők kölcsönhatásaként alakul ki a kórkép.
Az atherosclerosis klasszikus rizikófaktorain kívül (magas vérnyomás, lipid-anyagcserezavar, diabetes, dohányzás) a betegség kialakulását az endothel sejtek funkcióját a thrombus-képzést befolyásoló enzimek genetikai variánsai (génpolimorfizmus) is befolyásolhatják. Bebizonyosodott, hogy az érendothel és simaizomsejtek fokozott ploriferációja is hozzájárulhat az érszűkület, stenosis kialakulásához. Ugyanakkor az endotheliális nitrogén monoxid szintetáz (eNOS) enzim által termelt nitrogén monoxid (NO) atheroprotektív hatású. Előzetes vizsgálatokban kimutatták, hogy az eNOS 298 Glu/Asp polimorf változata alacsony NO termeléssel társul, ami az endothel funkció károsodása következtében értónus-bövekedéshez, thrombusképződéshez vezet és hozzájárul az atherosclerosis kialakulásához. Az irodalmi adatok ellentmondóak az eNOS polimorfizmusnak az atherosclerosis patogenezisében betöltött szerepét illetően.
Avizsgálatok célja az eNOS 298 Glu/Asp (G→T) polimorfizmusok meghatározása egészséges személyekben, valamint atherosclerosisos és diabeteses betegekben. Összefüggést keresünk az akut myocardiális infarktus, a stroke és a carotis stenosis, valamint az eNOS 298 Asp/Asp és eNOS 298 Glu/Asp génpolimorfizmusok között. Felmerül annak a lehetősége, hogy a plazma homocystein-szint emelkedése károsíthatja a kisartériák endothel sejtjeit, amely az atherosclerosis kialakulásának kezdeti lépéseit jelenti. A magas plazma homocystein szint és folat metabolizmusban a methyléntetrehydrofola reduktáz (MTHFR) C677T enzim játszik szerepet. A TT/MTHFR genotípus magasabb homocystein-szinttel társul, amely alapján feltételezik, hogy növeli az atherosclerosis kialakulásának rizikóját. Vizsgálatokban összefüggést keresünk a diabeteses, valamint atherosclerosisos betegekben előforduló carotis stenosis, myocardialis infarktus és a TT MTHFR polimorfizmus előfordulása között. Ismertté vált az is, hogy a krónikus gyulladásos állapotok elősegítik az atherosclerosis kialakulását. Mivel a TNFα polimorfizmus (238G/A) elősegítheti a restenosis kialakulását, célunk a TNFα polimorfizmus (238G/A) meghatározása a egészséges kontroll, diabeteses és atherosclerosis vizsgálati csoportokban. A meghatározásokat ezres elemszámú (cca. 300-300 fő/csoport) mintákon tervezzük a következő módszerek alkalmazásával:
Klinikai vizsgálatok
A rutin vizsgálatokon túl minden személynél rögzítésre kerül az atherosclerosisban rizikófaktorként számon tartott dohányzás, kóros lipid-eltérés és diabetes, carotis stenosis, valamint - az atherosclerosis végpontjaiként - az akut myocardialis infarctus, illetve stroke előfordulása is rögzítésre kerül.
Génpolimorfizmus vizsgálatok
DNS izolálás: A DNS izolálás Wizard Genomic DNA Purification kit-tel (Promega) véralvadásgátolt (EDTA) perifériás vérmintából történik.
Genotípus analízis/SNP analízis: a minták genotípusát PCR-RFLP módszerrel ill. LightCycler real-time PCR-on olvadáspont (melting curve) analízissel határoztuk meg, a génpolimorfizmus vizsgálatokhoz LightCycler FastStart DNA Master HybProbe mix (Roche) kit-et alkalmazunk.
DNS szekvenálás: az eNOS génpolimorfizmusok estén a melting curve alapján polimorf eNOS mintákat direkt DNS szekvenálással is meghatározzuk ABI-PRISM 3130 Genetikai Analizátoron BigDye terminátor szekvenáló kit (Applied Biosystem) alkamazásával.
Bejelentkezés
